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Efectos de ruda SSP sobre la actividad del músculo liso gastrointestinal aislado de rata.
"Effects of ruta SSP on the activity of the smooth gastrointestinal muscle isolated of rat."
Carlota A Grigorjev y Nilda Y. Brizuela
Revista de la Facultad de Ciencias Médicas 2010; 67(2): 73-76

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Cátedra de Farmacología General.  Escuela Práctica Facultad de Ciencias Médicas Universidad Nacional de Córdoba.
Santa Rosa 1085, 5000 Córdoba. cgrigorjev@gmail.com

Introducción.

La ruda es un herbáceo perenne de 50-90 cm de altura, con tallos redondos y follaje verde azuloso. Es frecuentemente usado por sus propiedades medicinales (1) El uso de la ruda data desde el siglo XVI. Las hojas y yemas jóvenes contienen alcaloides, flavonoides, fenoles, aminoácidos, fucomarinas y saponinas (2). La ruda también es conocida por tener actividad como emenagogo, antihelmíntico, antirreumático (3, 4,5), antihipertensivo (6), antiséptico para la piel y repelente (7, 8), fungicida e insecticida (9, 10). Ruda puede causar también sangrado uterino en mujeres embarazadas, con posible muerte fetal (11, 12). Reportes de etnobotánica indican que es consumida por gente indígena para promover la menstruación, la expulsión fetal y como abortivo (13, 14). Se dice, además, que se emplea para regular los cólicos menstruales (15), ayudar en el parto y estimular la producción leche. Para la mayoría de los casos se toma un té de las hojas 2 o 3 veces al día.
El creciente interés por la medicina natural hace necesaria la evaluación de las propiedades de las plantas, ya que se utilizan para una gran variedad de dolencias y es relativamente pequeño el conocimiento acerca de su mecanismo de acción.
En este trabajo observamos cuales son los efectos de la ruda sobre la contractilidad de diferentes tipos de músculos del sistema digestivo en órganos aislados de ratas (estómago e intestino delgado), y si se observan diferencias a concentraciones crecientes del compuesto.

Material y métodos.

A- Animales de experimentación
Se emplearon hembras vírgenes de la cepa Wistar con un peso entre 220-250 gramos que se mantuvieron bajo un régimen de 14 horas de luz y 10 hs de oscuridad en una habitación con temperatura controlada y acceso libre a alimento balanceado y agua.
Dos días antes de realizar el experimento se le quitó el alimento balanceado manteniéndolas en las mismas condiciones de luz, temperatura y agua.

B- Elaboración de los extractos.
Se pesaron 10 g de hojas de ruda (R. graveolens y R chapelensis) para cada preparación de 100 mL, dejándose macerar en el disolvente (etanol absoluto), por un tiempo aproximado de 24 h, con agitación continua. Posteriormente los macerados se homogenizaron. Toda la fibra proveniente de la homogenización se separó del extracto por medio de filtración utilizando una bomba de vacío.
A estos extractos filtrados se les agregó 1g de carbón activado y mediante un agitador magnético se mezclaron, para después volverlas a filtrar por vacío, con el fin de separar los pigmentos del extracto, obteniendo un líquido cristalino café claro. El mismo que se concentró al 50 % en un evaporador rotatorio continuo. Finalmente el extracto concentrado se guardó en refrigeración hasta su uso en los experimentos en tejidos.

C- Efecto de la ruda en músculo.
Obtención del material: Los animales se sacrificaron con éter y luego se procedió a extraer el fundus del estómago y el duodeno del intestino delgado, para luego inmediatamente realizar las mediciones.
Modelo experimental de órgano aislado. La solución que se utilizó para bañar constantemente el tejido, es la denominada solución de Ringer y además Gas de burbujeo, Carbógeno (95 % 02 + 5% CO2). La solución siempre se preparó en el día y se mantuvo a 32°C para el experimento.
Preparación del sistema de órgano aislado. Es un sistema en el que se busca simular las condiciones fisiológicas en las que se encuentra un tejido en el organismo. Para esto es necesario establecer una serie de condiciones experimentales, entre las que destacan el mantener la temperatura óptima (32º C) por medio de un baño de agua, la cual se hace circular mediante una bomba peristáltica, desde un baño y a través de las cámaras de órgano aislado (que son de “doble camisa”), por la camisa externa. El interior de la cámara contendrá solución de Ringer con burbujeo continuo. El tejido en experimentación se mantuvo fijo por sus dos extremos, de un lado hacia el surtidor de la solución y del otro lado hacia un transductor de tensión, mismo que se mantiene conectado a un polígrafo para el registro de la actividad contráctil.
Calibración de los registros. Para interpretar la magnitud de la contracción expresada por el tejido, se llevó a cabo una calibración que consiste en colgar pesas de diferente valor (100 a 500 mg) del transductor para obtener un desplazamiento expresado en unidades de longitud que sirvió para expresarlo en unidades de masa.
Medición de registros. Del registro se midió la amplitud, la frecuencia y el tono muscular de relajación, en presencia del extracto, comparado contra el control.
La frecuencia de la contracción es el número de contracciones (ondas) que ocurren en una unidad de tiempo, en este caso un minuto, y se cuantifica a partir de la base (valle) de una onda hasta la base de la siguiente, o de cima (cresta) a cima. La duración de la contracción se consideró como el tiempo que existe entre el inicio de ésta y el final de la relajación. Este parámetro se puede tomar en diferentes niveles de la amplitud de la onda; en este trabajo, las mediciones en segundos se llevaron a cabo al 90 % de amplitud de la contracción. El tono muscular de la relajación es el estado de tensión que presenta el músculo en condiciones básales. En este caso, cuando el músculo se encuentre relajado, antes y después de cada contracción (inicio y final de la onda). Esta propiedad se mide en gramos, comparando contra el registro control.
Después de colocar los tejidos en las cámaras de órgano aislado se dejó 20 minutos para estabilización y se tomó el registro control de las contracciones espontáneas; posteriormente se utilizó el extracto de ruda en proporción de 50 mg/mL (planta:disolvente), administrándolo en cantidad de 50 μg /cámara y 100 μg/cámara. Después de cada aplicación de la ruda se procedió a lavar el tejido 3 veces en la cámara y comprobar si volvía a su estado basal para probar que los efectos observados eran debidos a la presencia de ruda en el medio. Las dosis de ruda utilizadas en este experimento, es la dosis mínima encontrada para obtener el efecto deseado.
Análisis estadístico: Se aplicó un análisis de test-t entre medias; siendo tomado como el valor de p≤0,05 como significativo.

Resultados.

A concentraciones de 5μl/ml el tono de duodeno disminuyo 23% y en estomago 27%.Sin embargo, a concentraciones de 10 μl / ml de extracto de ruda el tono disminuyo aún más, 32% y 35% respectivamente. (Figura 1)

Con respecto a la amplitud, disminuyó 50% en el estómago a dosis de 5 μl / ml, mientras que en el intestino delgado cayo un 60%. Con 10 μl / ml los cambios se hicieron mas evidentes, ya que en intestino delgado el cambio fue de 96% y de 75% en estomago aislado. (Figura 2)

Los cambios en la frecuencia de contracciones fueron mas evidentes a dosis de 10 μl / ml de extracto alcohólico ya que en estomago se pudo observar una disminución del 50% mientras que en duodeno fue del 32%.
A 5 μl /ml solo pudimos observar disminuciones de 22% en estomago. (Figura 3).
 

Discusión.

Los estudios en órganos aislados son medios muy útiles para evaluar la actividad farmacológica de una gran variedad de extractos de origen vegetal. (16). En la bibliografía se cita a la ruda para múltiples usos, ya desde la antigüedad, por ejemplo en España es utilizado como digestivo y para diarreas (17), también es citada como espasmolítico en caso de dolores menstruales, o en inflamaciones intestinales (18). La decocción de sus hojas se ingiere por té como antidisentérico (19) y contra el “frío al estómago” (19, 20). Se han encontrado pocos datos en la bibliografía sobre la manera de actuar de ruda, solo se ha visto su efecto como inotrópico y crono trópico positivo en aurícula de rata (21), y efectos en útero de rata (22).
En base a nuestras observaciones podemos concluir que el extracto de ruda tiene acciones directas sobre el músculo liso del aparato digestivo modificando los parámetros de tono, con una disminución a dosis de 5 μl/ml tanto en estómago como en duodeno, mientras que a dosis mayores de 10 μl/ml se observa una disminución solo en el órgano con mayor tono basal (duodeno).
Asociado a esto, se observan modificación del parámetro de la amplitud de las ondas, aunque este se logra recién a dosis mayores. Por otro lado, la frecuencia de las contracciones muestra alteraciones graduales de acuerdo con la dosis.
Por lo tanto la ruda es un efectivo espasmolítico dosis dependientes, por lo que el uso popular tendría un fundamento fisiológico.

Agradecimientos
Al Med. Federico Matorra por sus aportes técnicos y bibliográficos y a la Fundación Mundo Mejor, Medicina biológica: ambiente y Salud por su apoyo económico.



Referencias

1. Arenas, P.,Savitry, GP. :“La Ruda: Ruta chalepensis (L.) Rutaceae. Doininguezia; 1994, 11:7-25.
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